ምርቶች

የቀድሞ ጥናቶቻችን በኬኤስኤችቪ ኢንፌክሽን የመጀመሪያ እና የመጨረሻ ደረጃዎች ላይ ያለውን ወሳኝ ሚና አሳይተዋል።በዚህ ጥናት ውስጥ፣ የሞኖክሎናል ፀረ እንግዳ አካላትን (ፓነል) በመጠቀም የ ORF45 መስተጋብር ዳሰሳን።ቀደም ሲል ከታወቁት extracellular regulated kinase (ERK) እና p90 ribosomal S6 kinase (RSK) ፕሮቲኖች በተጨማሪ፣ የ~38 kDa እና ~130 kDa ታዋቂ የሆኑትን ጨምሮ ሌሎች በርካታ የተቀናጁ ፕሮቲኖችን አግኝተናል።Mass spectrometry 38-kDa ፕሮቲን ቫይራል ORF33 እና 130-kDa ፕሮቲን ሴሉላር USP7 (ubiquitin-specific protease 7) መሆኑን አረጋግጧል።የ ORF33 ማሰሪያውን ጎራ በማዕከላዊ ክልል ORF45 ውስጥ በተዘገበው የጋራ ስምምነት ላይ ወዳለው የ ORF45 እና የUSP7-ማሰሪያ ጎራ በጣም ወደተጠበቀው የካርቦክሳይል-ተርሚናል 19 አሚኖ አሲዶች (aa) ካርታ አዘጋጅተናል።የimmunofluorescence ቀለምን በመጠቀም ፣ ORF45 ከ ORF33 ወይም USP7 ጋር በሁለቱም በተተላለፉ ሁኔታዎች እና በ KSHV በተበከሉ ሕዋሳት ውስጥ ኮሎካልላይዜሽን አስተውለናል።በተጨማሪም፣ ORF45 ጥገኛ የሆነ የ ORF33/USP7 ክፍል ከኒውክሊየስ ወደ ቲ ሳይቶፕላዝም ማዛወር አስተውለናል።ORF45 ORF33- ወይም USP7-ማሰሪያ ጎራ በ ORF45 ከተሰረዘ የተሰረዘ የ ORF33 ፕሮቲን ክምችት መጨመር እንዳስከተለ ደርሰንበታል።በተጨማሪም በ KSHV ጂኖም ውስጥ ያለው የ ORF45 የተጠበቀው የካርቦክሲል ተርሚነስ መሰረዙ በ KSHV በተያዙ ህዋሶች ውስጥ ያለውን የ ORF33 ፕሮቲን መጠን በእጅጉ ቀንሷል እና የዘር ቫይረሶችን ማምረት ተወ።በጥቅሉ ውጤታችን የ ORF45 መስተጋብራዊ አካል አዳዲስ አካላትን መግለጥ ብቻ ሳይሆን በነዚህ ፕሮቲኖች መካከል ያለው መስተጋብር ለKSHV ሊቲክ ማባዛት ወሳኝ መሆኑን ያሳያል።Kaposi's sarcoma-associated ሄርፒስ ቫይረስ (KSHV) የበርካታ የሰው ልጅ ነቀርሳዎች መንስኤ ነው።KSHV ORF45 ለ KSHV ሊቲክ ማባዛት የሚያስፈልገው ባለ ብዙ ተግባር ፕሮቲን ነው፣ ነገር ግን ORF45 ወሳኝ ተግባራቶቹን የሚፈጽምበት ትክክለኛ ዘዴዎች ግልጽ አይደሉም።ቀደም ሲል ጥናቶቻችን እንዳረጋገጡት በሴሎች ውስጥ ያሉት ሁሉም ORF45 ፕሮቲን ከፍተኛ ሞለኪውላዊ ክብደት ባላቸው ውስብስቶች ውስጥ ይገኛሉ።ስለዚህ የ ORF45 መስተጋብር በሊቲክ ማባዛት ወቅት የሚናቸዉን ሚናዎች ለመረዳት ፈልገን ነበር።ሞኖክሎናል ፀረ እንግዳ አካላትን በመጠቀም፣ በ KSHV የተበከሉ ህዋሶች ውስጥ ያለውን ORF45 መስተጋብራዊ ዳሰሳ አደረግን።የ ORF45 ሁለት አዳዲስ አስገዳጅ አጋሮችን ለይተናል፡ የቫይራል ፕሮቲን ORF33 እና ሴሉላር ubiquitin-specific protease 7 (USP7)።በተጨማሪም በ ORF45 እና ORF33 መካከል ያለው መስተጋብር የKSHV ቫይረስ ቅንጣቶችን በብቃት ለማምረት ወሳኝ መሆኑን እናሳያለን፣ በዚህ መስተጋብር ላይ የታለመው ጣልቃገብነት KSHV የሊቲክ መባዛትን ለመግታት አዲስ ስትራቴጂን ሊወክል እንደሚችል ይጠቁማል።