ምርቶች

X-gal (እንዲሁም BCIG ለ 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside) ምህጻረ ቃል) ጋላክቶስ ከተተካ ኢንዶል ጋር የተያያዘ ኦርጋኒክ ውህድ ነው።ውህዱ የተቀናበረው በጄሮም ሆርዊትዝ እና ተባባሪዎች በ1964 ነው።የመደበኛው ኬሚካላዊ ስም ብዙ ጊዜ አጭር ወደሚሆነው ትክክለኛነት ነገር ግን እንደ ብሮሞክሎሮኢንዶክሲል ጋላክቶሳይድ ያሉ ብዙ አስቸጋሪ ሀረጎች ነው።ከኢንዶክሲል የሚገኘው X በ X-gal contraction ውስጥ የ X ምንጭ ሊሆን ይችላል።X-gal ብዙውን ጊዜ በሞለኪውላር ባዮሎጂ ውስጥ ኢንዛይም, β-galactosidase, በተለመደው ዒላማው ቦታ, β-galactoside መኖሩን ለመፈተሽ ያገለግላል.በተጨማሪም የዚህን ኢንዛይም እንቅስቃሴ በሂስቶኬሚስትሪ እና በባክቴሪያሎጂ ውስጥ ለመለየት ጥቅም ላይ ይውላል.X-gal ኢንዛይም-ካታላይዝድ ሃይድሮሊሲስን ተከትሎ እንደ ኢንዲጎ ቀለም የማይሟሟ ሰማያዊ ውህዶችን ከሚሰጡ ከብዙ ኢንዶክሲል ግላይኮሲዶች እና ኢስተር አንዱ ነው።

X-gal የላክቶስ አናሎግ ነው፣ እና ስለዚህ በ β-galactosidase ኢንዛይም በዲ-ላክቶስ ውስጥ ያለውን β-glycosidic ቦንድ በሚቆርጥ ሀይድሮላይዝድ ሊደረግ ይችላል።X-gal በ β-galactosidase ሲሰነጠቅ ጋላክቶስ እና 5-bromo- 4-chloro-3-hydroxyindole - 1. የኋለኛው ደግሞ በድንገት ይቀንስና ወደ 5,5'-dibromo-4,4'-dichloro ኦክሳይድ ይደረጋል. -indigo - 2, የማይሟሟ ኃይለኛ ሰማያዊ ምርት.X-gal ራሱ ቀለም የለውም, ስለዚህ ሰማያዊ ቀለም ያለው ምርት መኖሩ ስለዚህ ንቁ β-galactosidase መኖሩን እንደ ፈተና ሊያገለግል ይችላል.ይህ በተጨማሪ ባክቴሪያል β-galactosidase (ላcZ ተብሎ የሚጠራው) በተለያዩ አፕሊኬሽኖች ውስጥ እንደ ዘጋቢ ጥቅም ላይ እንዲውል ያስችላል።

በሁለት-ድብልቅ ትንተና, β-galactosidase እርስ በርስ የሚገናኙትን ፕሮቲኖች ለመለየት እንደ ዘጋቢ ሊያገለግል ይችላል.በዚህ ዘዴ የጂኖም ቤተ-መጻሕፍት እርሾን ወይም ባክቴሪያን በመጠቀም ለፕሮቲን መስተጋብር ሊታዩ ይችላሉ።በተጣራ ፕሮቲኖች መካከል የተሳካ መስተጋብር በሚፈጠርበት ጊዜ፣ የማግበር ጎራ ከአስተዋዋቂ ጋር እንዲተሳሰር ያደርጋል።አስተዋዋቂው ከላክዜድ ጂን ጋር ከተገናኘ የ β-galactosidase ምርት በ X-gal ፊት ሰማያዊ ቀለም ያላቸው ቅኝ ግዛቶች እንዲፈጠሩ ያደርጋል, ስለዚህ በፕሮቲኖች መካከል የተሳካ ግንኙነት መኖሩን ያሳያል.ይህ ዘዴ ከ106 በታች የሆኑ መጠን ያላቸውን ቤተ-መጻሕፍት በማጣራት ላይ ብቻ የተገደበ ሊሆን ይችላል።የ X-gal በተሳካ ሁኔታ መቆራረጡ የኢንዶል ተለዋዋጭነት ስላለው መጥፎ ሽታ ይፈጥራል።

X-gal ራሱ ቀለም የሌለው እንደመሆኑ መጠን ሰማያዊ ቀለም ያለው ምርት መኖሩ ንቁ β-galactosidase መኖሩን ለመፈተሽ ሊያገለግል ይችላል።

ይህ የነቃ ኢንዛይም በቀላሉ መለየት ለ βgalactosidase (የ lacZ ጂን) ጂን በተለያዩ አፕሊኬሽኖች ውስጥ እንደ ዘጋቢ ጂን እንዲያገለግል ያስችለዋል።