ምርቶች

የኮሊሲን E1 ቻናል ዶሜይን ሽፋን በፍሎረሰንት ሬዞናንስ ኢነርጂ ሽግግር (FRET) ተጠንቷል።FRET በጄኔቲክ የተረጋገጠ ፍሎረሰንት አሚኖ አሲድ (ኮማሪን) ለጋሽ እና የ FRET ተቀባይ ሆኖ ከDABMI (4-dimethylamino) phenylazophenyl-4'-maleimide ጋር የተሳሰረ የሳይስቴይን ቅሪት ተመረጠ።የፍሎረሰንት coumarin ቅሪት በፕሮቲን ውስጥ የተካተተ በ orthogonal tRNA/aminoacyl-tRNA synthetase ጥንድ በኩል በኮሊሲን ቻናል ጎራ ውስጥ ወደሚገኝ ማንኛውም ጣቢያ እንዲመረጥ አስችሏል።እያንዳንዱ ተለዋጭ ለ coumarin incorporation እና cysteine ​​(TGT) ሚውቴሽን ለ DABMI አባሪ የማቆሚያ (TAG) ሚውቴሽን ይዟል።በሄልስ 1-6 ውስጥ ያሉ ስድስት የኢንተርሄልካል ርቀቶች የFRET ትንታኔን በመጠቀም ለሁለቱም የሚሟሟ እና ሽፋን-ታሰሩ ግዛቶች ተወስነዋል።የ FRET መረጃው በሄልስ 3-6 መካከል ባለው የመሃል ርቀቶች ላይ ትልቅ ለውጦችን ያሳያል በ membrane ማህበር ላይ ስለ ሰርጥ ጎራ ሽፋን አዲስ ግንዛቤን ይሰጣል።በአጠቃላይ የ coumarin-DABMI FRET የ interhelecal ቅልጥፍና በሜምብ ማሰሪያ ላይ ቀንሷል፣ይህም በጃንጥላ ሞዴል የኮሊሲን ቻናል ላይ ተገንብቷል።ለሰርጡ ጎራ የተዘጋ ሁኔታ ግምታዊ ሞዴል በአሁን እና ቀደም ሲል በታተመው የFRET መረጃ መሰረት ተዘጋጅቷል።ሞዴሉ በሄሊስ 8 እና 9 በተሰራው ማእከላዊ ትራንስሜምብራን የፀጉር ፒን ዙሪያ ከሴሉላር ሴል ውጭ እና የሜምብራል interfacial ማህበር ሄሊስ 1-6 ፣ 7 እና 10 በሰዓት አቅጣጫ ሄሊስ 1-7 ክብ አቀማመጥን ይጠቁማል።